即日起检验科已开展“结核感染T细胞γ-干扰素释放试验”（I-SPOT.TB，酶联免疫斑点法）。说到结核病相信大家都不陌生，它是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部结核感染最为常见。排菌者为其重要的传染源，通过把含有结核菌的微粒排到空气中进行飞沫传播。近年来，很多医院采用γ-干扰素释放试验（I-SPOT.TB，酶联免疫斑点法）对结核感染进行筛查。那么I-SPOT.TB的检测原理是什么？适应症有哪些？有何独特优势？以及如何判读结果？标本采集应注意什么？诸如此类的问题，相信读完此文，您一定会有所收获。
一、I-SPOT.TB检测原理:
结核分枝杆菌感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染者和既往结核感染者的 T细胞受结核抗原刺激致敏，形成活化的效应T细胞。I-SPOT.TB试验是利用结核分枝杆菌特异抗原，刺激全血中的T细胞，结核感染者及既往感染者血液中的T细胞再次接收到抗原刺激，会迅速形成效应T细胞，并分泌γ干扰素。通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT），分泌的γ干扰素被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获，可溶的底物溶液加入到每个检测孔中，在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀点。每一个斑点代表一个分泌γ干扰素的T细胞，计数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T细胞数量。
二、I-SPOT.TB用于结核感染检测、肺结核/肺外结核诊断与鉴别诊断具有独特优势:
1、特异性好：只针对结核分枝杆菌复合群敏感，对绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗(BCG) 无交叉反应。
2、灵敏度高:基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率。
3、快速简便:简单的血液检测，当天采集次日报告结果。
三、I-SPOT.TB检测的适应症:
I-SPOT.TB的适应证主要包括结核分枝杆菌潜伏感染的诊断和活动性结核病的辅助诊断。
1、 缺少细菌学诊断依据（如痰菌阴性）的活动性结核病的患者，可起到补充或辅助诊断的作用；
2、在活动性结核病辅助诊断中的应用;
3. 活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断；
4. 排查儿童结核分枝杆菌（MTB）感染；
5.对HIV感染人群进行LTBI筛查；
6. 需要接受糖皮质激素或肿瘤坏死因子拮抗剂等免疫抑制治疗，或需要接受化疗，或器官移植的患者排查LTBI。
备注：I-SPOT.TB（IGRA）应用指南：（一）中华人民共和国卫生行业标准WS 288-2017
（1）结核病疑似病例
成人及5岁以上儿童：
仅胸部影像有活动性肺结核相符的病变5岁以下的儿童：有肺结核可疑症状并伴有以下任一条：
a.有肺结核患者接触史
b.结核菌素皮肤试验，中度阳性或强阳性
c.γ-干扰素释放试验阳性(I-SPOT.TB)
（2）结核病临床诊断病例成人：
仅胸部影像有活动性肺结核相符的病变并伴有以下任一条
a.有肺结核可疑症状
b.结核菌素皮肤试验，中度阳性或强阳性
c.γ-干扰素释放试验阳性(I-SPOT.TB)
d.结核抗体检测阳性
e.肺外组织病理为结核病变
f.支气管镜下符合结核病改变儿童同时具备以下3条：
a.胸部影像有活动性肺结核相符的病变
b.伴有肺结核可疑症状
c.结核菌素皮肤试验，中度阳性或强阳性或γ-干扰素释放试验阳性(I-SPOT.TB)
（二）中国银屑病生物制剂治疗指南（2021）活动性结核病患者禁用生物制剂。
对于非活动性结核病和结核潜伏感染患者，应慎用生物制 剂，如需要使用，则应在治疗前先给予预防性抗结核治疗。建议对准备接受所有生物制剂治疗的银屑病患者均进行结核病筛查和评估。包括胸部X线或CT检查、结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）试验或干扰素 γ 释放试验（IGRA），以明确有无活动性结核病、非活动性结核病或结核潜伏感染。对于非活动性结核病和结核潜伏感染患者，经预防性抗结核治疗后启用生物制剂者，建议在使用生物制剂后第 3、6个月复查胸部X线/CT、PPD/IGRA(I-SPOT.TB)，之后每6个月复查1次，直到停药后3个月。对于使用TNF⁃α抑制剂的患者以及具有高危因素的人群，建议适当增加随访频率。
（三）中国银屑病诊疗指南（2023版） 活动性结核病患者禁用生物制剂。对于潜伏结核和非活动性结核病患者，应慎用生物制剂，如需要使用，则应在治疗前请专科医师评估病情，可先给予预防性抗结核治疗。非活动性结核病和结核潜伏感染经预防性抗结核治疗后启用生物制剂者，选择非TNF⁃α抑制剂 安全性优于TNF⁃α抑制剂，建议使用生物制剂后第 3、6 个月复查胸部 X 线/CT、PPD/干扰素 γ 释放试验，之后每6个月复查1次，直到停药后 3个月。对使 用TNF⁃α抑制剂患者及具有高危因素人群，建议适当增加随访频率。
（四）老年肺结核诊断与治疗专家共识（2023版）肺结核发病机制主要为体内休眠的结核分枝杆菌内源性复燃以及外源性再感染。随着年龄增长，老年人机体免疫功能减退，体内休眠的结核分枝杆菌易于复燃。加之老年肺结核患者临床表现不典型及影像学特征复杂等，其特点多表现为“四高二低一易”，即高发病率、高患病率、高构成比 、高病死率、低病原学阳性率、低治疗成功率、易延误诊治。结合老年人的免疫功能状态及老年肺结核患者的基础疾病特征，建议具有表中危险因素的老年潜伏结核感染患者进行相关化验检查排查活动性结核病。疑似肺结核的老年患者可行 γ干扰素释放试验（IGRA）检测辅助诊断。目前临床上用于诊断LTBI的免疫学方法包括结核菌素皮肤试验、γ干扰素释放试验。IGRA比起PPD皮肤试验，具有特异性高、不受卡介苗接种及大多数非结核分枝杆菌感染的干扰、可在常规诊断依据的基础上起到更好补充或辅助诊断的作用。
（五）结核病与糖尿病共病的治疗管理专家共识成人结核病发病者中大约15％是由糖尿病(diabetes mellitus，DM)因素引起的，总体上DM使得发生活动性结核病的风险增加2～3倍。由于结核病与糖尿病共病患者早期发现难，耐药率高，治疗依从性差，管理难度大，死亡率相对较高，是妨碍结核病控制取得良好效果的重要因素之一，也将成为实现世界卫生组织2035年终止结核病目标的一大障碍。在糖尿病患者中筛查结核病，可早期识别结核病症状，及时诊断和治疗，减少结核病在医疗机构和社区中传播。因此，应当积极筛查结核病。凡是出现咳嗽2～3周以上、发热、盗汗或不明原因体质量减轻的糖尿病患者，应高度怀疑是否患有结核病，并将其转诊至定点医疗机构的结核病门诊做进一步排查。
四、结果判读:
根据抗原A孔或抗原B孔的斑点数判读结果:
1、当空白对照孔斑点数为0-5个时且(抗原A孔或抗原B孔班点数)减去(空白对照孔班点数)≥6,为“阳性”。
2、当空白对照孔斑点数为6-10个时且(抗原A孔或抗原B孔斑点数)≥2X (空白对照孔班点数)，为“阳性”。
3、如不符合上述标准，且阳性对照孔正常时检测结果为“阴性”。
五、结果解释
阳性结果:
1.提示患者体内可能存在结核分枝杆菌特异性效应T细胞，患者存在结核感染。I-SPOT.TB不能作为诊断活动性结核的金标准，必须结合患者的临床症状和其他的相关检查结果共同作出临床判断。
2.可能是其他分枝杆菌的感染引起，如堪萨斯、苏氏、戈登分枝杆菌（这些分枝杆菌可致HIV患者机会感染）。
3.皮下注射PPD也许会造成I-SPOT.TB假阳性结果，因此需同时检测I-SPOT.TB和TST时，I-SPOT.TB的血样最好在TST实验前或者实验后3天内采取。
阴性结果:
提示患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应T细胞。但若出现以下情况，阴性结果不能排除结核分枝杆菌感染可能：
标本采集及运送要求:
1.采集外周全血，无须空腹，需用肝素抗凝（含肝素锂、钠）（采血管到检验科领取），不得使用EDTA抗凝。
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2.采血量要求：
2岁以下儿童不得低于2-3ml；
其他患者不得低于4-6ml；
免疫力低下/受抑制患者6-8ml。
3.标本室温（15-25℃）保存或运输，不得冷藏和冷冻。
4.样本采集后4小时内送到实验室，以便尽快完成检测。
5.一周内有输血史或做过PET-CT的患者会影响血液中淋巴细胞的分离，建议两周后再行检测。
6.运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果。
周一、周四（节假日除外）当天采集并于10:00之前送至二楼检验科，次日上午11:30出结果。
注意事项:
I-SPOT.TB并不能区分活动性结核病和LTBI，也不能准确预测LTBI发展为活动性结核病的风险。因此，其结果不能作为单独或是决定性的诊断结核病的依据，需要结合临床症状、影像学结果、诊断性抗结核疗效等综合判断。