病理组织固定那些事儿

高医 · 病理科
创建于2023-10-08
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Why

病理组织为什么要固定

     病理活体组织固定是病理质控流程的最关键步骤,是病理制片的第一步。有效的固定才能制作出优质切片,为病理诊断提供基础依据。如果组织固定不佳,造成组织变质腐烂、抗原丢失,将严重影响切片质量,也将导致诊断困难或无法诊断,并严重影响到后续免疫组化及基因检测结果的准确性。

When

标本从离体到固定的时间

     根据指南及共识,推荐送检手术标本在离体后0.5-1h及时固定,其中胃肠等空腔脏器因含蛋白酶及消化液等,建议在离体0.5h以内固定。

How

病理科标本的规范化固定的具体要求

     组织固定这一步是不可逆的,也是不可补救的,故此组织标本离体后,手术医生需配合完成标本的质控管理,按以下要求处理标本:

一、规范

     规范地剖开标本。大标本应在不妨碍病理检查情况下切开固定。例如,有腔器官或肿物,要按其自然状态剪开,暴露黏膜面或内表面的病变;乳腺、肝、脾、肾等实质器官或结节状大肿物,沿其长轴每间隔1.5cm纵向平行剖开,切成书页状。

二、及时

      标本离体后30分钟内必须用中性福尔马林固定液进行固定。

三、合适的固定液

     常规标本用10%中性缓冲福尔马林液固定。

四、足量

      固定液的量约为标本体积的5-10倍。

五、足够的固定时间

      小标本的固定时间为4~6h,大标本为18~24h或更久。

六、特殊标本特殊固定

      特殊标本要按指定要求进行处理。例如,睾丸穿刺标本要采用Bouin液固定;术中冰冻送检的标本则不需要固定,离体后用干纱布包裹,立即新鲜送检。

手术标本规范固定的合格标准包括三个方面:

    ①离体后30 min~1 h内固定;

    ②标本按照作业指导书的要求规范切开;

    ③固定液充足。

以上三条同时达标,评估为“合格”,有任何一条不达标,即评估为“不合格”。

什么是甲醛?

     甲醛是一种常见的挥发性试剂,又称为福尔马林,10%浓度的中性缓冲液是组织处理过程中最常用的固定剂,主要用于保存和固定各种组织生物样本。甲醛在病理科的使用量非常大,尤其是在预处理、取材、脱水固定等步骤。

性状与成分:

       甲醛为无色澄明液体,有刺激性特臭;10%中性福尔马林固定液主要由去离子水、福尔马林、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠成份组成。

原理与用途:

       本品为醛类固定液,是一种交联性组织固定剂,主要通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用,能使细胞内物质尽量保持其生活状态时的结构和位置。本品采用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节其pH值至中性,能最大限度地保护组织抗原。主要用于组织标本的保存、固定和防腐。

适用范围:

     适用于人体、动物组织标本的固定。

固定液如何配置:

     10%中性缓冲福尔马林:

      甲醛 100ml

      磷酸二氢钠 4g

      磷酸氢二钠6.5g

      蒸馏水 900ml

为什么首选10%中性福尔马林固定液?

         中性缓冲福尔马林渗透力强、组织收缩小,能使大多数抗原物质保存较好,提高免疫组织化学检测的阳性率,因此推荐作为首选固定液。

不固定病理标本会有什么后果?

      1、固定是病理制片过程中最重要的一步,因为这是不可逆的,也就是无法补救的。组织只有经过固定,才能完成随后的一系列制作,直至切片的最终完成。

      2、如果组织固定不佳,造成组织腐烂、抗原失活,将影响切片质量,也将导致诊断困难或无法诊断,甚至影响免疫组化及基因检测结果准确性。因此及时、剖开、足量固定液的固定非常重要。

      3、固定不佳还会造成细胞溶解破坏,组织扭曲变形;在室温下极易使细菌迅速繁殖而腐败,组织结构被破坏,不利于形态学的诊断。

      4、会导致标本自溶、腐败、干涸等,从而影响病理诊断的准确性。精准的病理诊断是实现精准医疗的关键步骤,而病理组织固定是病理诊断的第一环节。

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文章由 美篇工作版 编辑制作
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